小鼠胱天蛋白酶11elisa試劑盒操作流程

小鼠胱天蛋白酶11elisa試劑盒操作流程：

1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

2酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。

3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍將洗滌液注滿(mǎn)板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿(mǎn)板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

4陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

6洗板，同4。

7每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

9洗板，同4。

10每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

11每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。