熒光染料，專門用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)

　　　　細(xì)胞膜作為細(xì)胞的邊界，不僅在結(jié)構(gòu)上為細(xì)胞提供了相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，并參與了包括物質(zhì)運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞自噬在內(nèi)的許多重要生理活動(dòng)。利用熒光染料對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行標(biāo)記和示蹤的成像技術(shù)是研究細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的重要手段。

那么細(xì)胞膜染色有哪些常見染料可以選擇？

     其中DiD、DiO、DiI、DiR和DiS染料是最常見的細(xì)胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，專門用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在**濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們與細(xì)胞膜結(jié)合后熒光強(qiáng)度會(huì)大大增強(qiáng)，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命，高熒光強(qiáng)度至少維持在30天，甚至長達(dá)2年以上。

    DID染料的染色效率高，均一，不易猝滅，無明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DID已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì) 胞、造血干祖細(xì)胞等。

   這些染料熒光顏色區(qū)分明顯：DiI被激發(fā)后為橙色熒光，DiO為綠色熒光，DiD為紅色熒光，DiR為深紅色熒光。所以這些染料可以用來對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用633 nm He-Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在活體成像中用來示蹤。