Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B-Cas9-589培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)步驟

Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞；HEC-1-B-Cas9-589培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二、細(xì)胞處理：

1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

己糖激酶（HK）試劑盒

丙酮酸激酶（PK）試劑盒

磷酸果糖激酶（PFK）試劑盒

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）試劑盒

丙酮酸（PA）測(cè)試盒

抗壞血酸（AsA）含量測(cè)試盒

脫氫抗壞血酸（DHA）含量測(cè)試盒

L-半乳糖苷-1,4-內(nèi)酯脫氫酶（Gal LDH）測(cè)試盒

抗壞血酸氧化酶（AAO）活性測(cè)定試劑盒

抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)定試劑盒

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒

脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）活性測(cè)定試劑盒

雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒

雙縮脲法蛋白含量測(cè)定試劑盒

考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測(cè)定試劑盒

考馬斯亮藍(lán)法蛋白含量測(cè)定試劑盒

BCA蛋白法含量測(cè)定試劑盒

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）試劑盒

谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）試劑盒

谷氨酰胺合成酶（GS）試劑盒

脯氨酸（PRO）含量試劑盒

氨基酸（AA）含量測(cè)定試劑盒

半胱氨酸（Cys）含量測(cè)定試劑盒

谷氨酸（Glu）含量試劑盒

ATP含量試劑盒

ADP含量試劑盒

AMP含量試劑盒

Na+k+   ——ATP酶試劑盒

Ca++Mg++ ——ATP酶試劑盒