豬鞭蟲PCR檢測試劑盒使用方法

豬鞭蟲PCR檢測試劑盒使用方法:

　　注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

　　1. 樣本處理(樣本處理區(qū))

　　待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書。陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。

　　2. 擴增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))

　　取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。

　　組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

　　1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

　　2.加樣(樣本處理區(qū))

　　3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

樣本采集、存放及運輸:

　　1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集。

　　2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次)。

　　3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。