不同elisa方法的原理及步驟

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法）是一種廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，其核心原理基于抗原與抗體的特異性結(jié)合，并利用酶的催化作用放大信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)特定抗原或抗體的檢測(cè)和定量分析。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)對(duì)象的不同，ELISA可以分為多種方法，主要包括直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)性ELISA等。

1. 直接ELISA

原理：

直接ELISA使用酶標(biāo)記的一抗（即一抗直接帶有酶標(biāo)記）與固相載體上的抗原結(jié)合，通過(guò)酶催化底物顯色來(lái)檢測(cè)目標(biāo)抗原的存在和濃度。該方法操作簡(jiǎn)單，但靈敏度相對(duì)較低。

步驟：

包被：將抗原固定在ELISA板上；

封閉：加入封閉液防止非特異性結(jié)合；

加樣：加入酶標(biāo)記的一抗；

洗滌：去除未結(jié)合的抗體；

顯色：加入底物溶液，酶催化顯色；

讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值[。

2. 間接ELISA

原理：

間接ELISA通過(guò)兩步抗體結(jié)合（一抗+酶標(biāo)記的二抗）來(lái)放大信號(hào)，提高了檢測(cè)的靈敏度。適用于檢測(cè)抗體。

步驟：

包被：將抗原固定在ELISA板上；

封閉：加入封閉液；

加樣：加入待測(cè)樣品中的一抗；

加酶標(biāo)二抗：加入與一抗對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)記二抗；

洗滌：去除非結(jié)合的二抗；

顯色：加入底物溶液；

讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值[。

3. 雙抗體夾心ELISA

原理：

雙抗體夾心法用于檢測(cè)抗原，原理是使用兩種針對(duì)抗原不同表位的抗體（捕獲抗體和檢測(cè)抗體），形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物，適用于大分子抗原的檢測(cè)。

步驟：

包被：用捕獲抗體包被ELISA板；

封閉：加入封閉液；

加樣：加入待測(cè)抗原；

加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體；

洗滌：去除未結(jié)合的抗體；

顯色：加入底物溶液；

讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值[。

4. 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA

原理：

競(jìng)爭(zhēng)性ELISA用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原。原理是將已知量的標(biāo)記抗原與待測(cè)樣品中的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記抗原的結(jié)合量來(lái)間接推算樣品中抗原的濃度。

步驟：

1.包被：將特異性抗體包被于ELISA板上；

尋找高質(zhì)量特異性抗體，了解高特異性抗體的臨床應(yīng)用價(jià)值

2.競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合：向微孔中加入標(biāo)記抗原和待測(cè)樣品；

3.洗滌：去除未結(jié)合的抗原；

4.顯色：加入底物溶液；

5.終止反應(yīng)：加入終止液；

6.讀數(shù)：在酶標(biāo)儀上讀取吸光度值；

7.數(shù)據(jù)分析：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中抗原濃度[。

總結(jié)

不同的ELISA方法各有其適用范圍和優(yōu)缺點(diǎn)。選擇合適的ELISA方法應(yīng)根據(jù)檢測(cè)目標(biāo)（抗原或抗體）、分子大小、靈敏度要求以及實(shí)驗(yàn)條件等因素綜合考慮。對(duì)于小分子抗原或半抗原，推薦使用競(jìng)爭(zhēng)性ELISA；對(duì)于大分子抗原或蛋白質(zhì)，雙抗體夾心法是首選；而間接法因其高靈敏度常用于抗體檢測(cè)。