氣泡會(huì)對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生哪些影響

   氣泡確實(shí)可能對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾，尤其是在液體分配和孵育階段。當(dāng)樣本或試劑中存在氣泡時(shí)，它們可能阻礙抗原抗體的有效結(jié)合，導(dǎo)致反應(yīng)不均勻或信號(hào)讀取異常。具體影響主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

   首先，氣泡可能干擾光學(xué)信號(hào)的檢測(cè)。ELISA依賴酶標(biāo)儀對(duì)微孔板底部的吸光度進(jìn)行測(cè)量，而氣泡會(huì)散射光線，導(dǎo)致吸光度值假性升高或波動(dòng)，尤其在最后顯色步驟中，微小的氣泡可能被誤 判為陽(yáng)性信號(hào)。曾有研究表明，直徑超過(guò)1mm的氣泡可使OD值偏差高達(dá)15%。

   其次，在孵育過(guò)程中，氣泡占據(jù)液面空間會(huì)減少有效反應(yīng)面積。若氣泡附著在包被抗體的孔壁，會(huì)形成局部"隔離區(qū)"，阻礙樣本與固相抗體的接觸。這種情況下，即使充分混勻，氣泡覆蓋區(qū)域的反應(yīng)效率仍會(huì)顯著降低，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線線性度下降或樣本重復(fù)孔間CV值增大。

   為減少氣泡干擾，實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需注意：1）加樣槍頭應(yīng)貼壁緩慢釋放液體，避免快速?zèng)_擊產(chǎn)生氣泡；2）孵育前可短暫離心微孔板（1000rpm，1分鐘）去除氣泡；3）使用表面活性劑如Tween-20可降低液體表面張力。值得注意的是，自動(dòng)化ELISA系統(tǒng)通過(guò)超聲波除泡模塊能更有效控制該問(wèn)題，而手工操作時(shí)建議在讀數(shù)前用無(wú)菌針頭挑破肉眼可見(jiàn)的氣泡。

   質(zhì)量控制方面，建議每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置"氣泡干擾對(duì)照孔"：故意在陰性對(duì)照孔中**氣泡，觀察其對(duì)基線信號(hào)的影響程度。若發(fā)現(xiàn)氣泡導(dǎo)致OD值異常，應(yīng)重新檢測(cè)受影響樣本。通過(guò)規(guī)范操作和系統(tǒng)驗(yàn)證，可將氣泡干擾控制在允許誤差范圍內(nèi)。